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在cDNA首链合成试剂盒操作中应留神哪5个方面

发布时间:2021-11-20   点击次数:16次
  cDNA首链合成试剂盒运用的基本原理就是将抗原抗体固定到特定的载体上进行反应,并通过酶催化底物发生化学变化,将抗原抗体反应通过颜色的办法显现出来。固相吸附蛋白对错特异性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面依然有吸附其它蛋白的才华,为了确保抗原抗体反应的特异性,因而被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭,也可用脱脂奶粉、明胶、牛血清代替。酶可以通过共价键与抗原或抗体衔接构成结合物,当抗原抗体反应的时分,被检测靶方针中也结合了酶分子。
 
  操作中应留神的5个方面:
 
  1.跟着病况的进展或由其他因素影响,某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇,因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中,标本恰当稀释还可下降非特异性反响。
 
  2.加样一般运用加液器,在cDNA首链合成试剂盒中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加间断液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴,避免交叉污染。加酶结合物、底物和间断液时则不需更换吸嘴。
 
  3.在成批手艺检测中,还应留神操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原抗体反响和酶促反响时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不留神可能会导致过错效果或定量不准。
 
  4.洗刷是cDNA首链合成试剂盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的免疫反响物,间断抗原抗体反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。
 
  5.断定效果须运用cDNA首链合成试剂盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。酶标仪具有杰出的重复性。

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