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和传统基因克隆相比,无缝克隆技术有多方面的突出优点

发布时间:2021-10-24   点击次数:41次
  无缝克隆试剂盒是一种新型、快速并且高效的定向克隆技术,可以在任意载体的任意位置一次插入多个目的基因片段。不依赖于内切酶和连接酶,一步定向克隆至任何载体中,可同时克隆多个DNA片段。
 
  无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术,具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点,用于单个DNA片段的克隆,多个DNA片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。
 
  和传统的基因克隆方法相比,无缝克隆试剂盒的无缝克隆技术有多方面的突出优点:
 
  (1)构建的克隆没有任何额外的碱基序列,因此是真正的"无缝克隆";
 
  (2)可通过一个反应将一个或多个片段快速、定向地插入到载体的任何位置;
 
  (3)待插入的PCR扩增产物无须酶切;
 
  (4)插入片段的大小范围宽,从20bp左右的小片段到10kb左右的大片段都可以成功插入;
 
  (5)可通过PCR扩增获得线性化载体,因此限制性内切酶消化并不是克隆所必须的;
 
  (6)酶催化的重组连接反应非常快速和高效,对于一个片段的插入仅需50℃处理15分钟;对于三个片段的插入仅需50℃处理30分钟,而对于5个片段的插入也仅需50℃处理约60分钟;
 
  (7)只有插入片段和线性化载体的末端才能发生同源重组,可以有效避免非特异性的同源重组;
 
  (8)阳性克隆比例高,单个DNA片段克隆的阳性率几乎为100%,三个片段的克隆阳性率约为70-80%。

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