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关于核酸染料的两种使用方法介绍

发布时间:2021-05-31   点击次数:86次
  核酸染料具有安全、灵敏度高、可生物降解等突出特点。该荧光染料在紫外和可见光区皆有较强的吸收,所以该染料既可以在紫外光下观察,也可在蓝绿可见光下观察。
 
  核酸染料优势:
 
  1、安全无毒
 
  独特的油性和大分子特点,使其热稳定性好,不易挥发,不能穿透细胞膜,安全无毒。
 
  2、与蓝色可见光激发装置结合
 
  蓝光切胶,双重安全。核酸染料既适用于254nm紫外凝胶成像系统,又与蓝色可见光激发装置结合,使用蓝光仪远离紫外对身体和核酸产物的损伤。
 
  3、高灵敏度,低背景
 
  荧光信号强,背景信号低,具有高信噪比,在紫外成像下灵敏度与EB相当,但在蓝光下灵敏度比EB更高,使用也更加灵活方便。
 
  使用方法:
 
  1.胶染法(用法同EB)
 
  (1)制胶时加入核酸染料。
 
  (2)按照常规方法进行电泳。
 
  注意事项:此方法染色染料用量相对较少,500μL染料大约可以做100块50mL的胶。由于具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。可兼容所有常用的电泳缓冲溶液。含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备,并长期保存直到使用。此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
 
  2.泡染法
 
  (1)按照常规方法进行电泳。
 
  (2)用H2O将10,000×储液稀释约3,300倍到0.1MNaCl中,制成3×染色液。
 
  (3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中,缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶,室温振荡染色30min左右,染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

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