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实时荧光定量PCR主要应用在哪些方面

发布时间:2021-05-28   点击次数:63次
  实时荧光定量PCR是指在DNA扩增反应中,以某种检方式的检测和读取每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。常用的是荧光化学物质的读数来只是PCR产物总量。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
 
  实时荧光定量PCR与普通PCR的主要区别:常规PCR中,PCR产物通过凝胶电泳,然后进行成像分析,常规PCR只能通过终点法对扩增产物进行定性分析,而不能进行定量分析;荧光定量PCR中,PCR反应体系中加入了荧光分子,通过荧光信号的变化来反应扩增产物的变化,使PCR产物的实时检测成为可能。
 
  它的原理是利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,精确的对起始模板的定量分析。在PCR反应加入能示踪扩增产物的荧光化学物质,随着PCR反应的进行,扩增产物不断累积,荧光信号强度不断增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,得到一条荧光扩增曲线图,从而通过荧光强度变化实时监测产物量的变化。
 
  实时荧光定量PCR技术的应用:
 
  1.基因工程研究领域
 
  ①基因表达研究:对β地中海贫血症患者β与γ珠蛋白mRNA水平进行检测,其结果特异性强、定量准确,为了解β地中海贫血的分子病理机制及其临床诊断提供了可靠的检测数据。
 
  ②转基因研究:利用两种发光探针及适当的循环阈值,扩增一个转移后的基因和一个对照基因,以分析转基因老鼠接合性。
 
  ③单核苷酸多态性(SNP)及突变分析:用于检测基于两条探针和基因组的不稳定性。
 
  2.医学研究领域
 
  ①病原体检测:目前,人们用此方法对人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、结核杆菌、巨细胞病毒、EB病毒、流感病毒A、流感病毒B等病原体的检测。
 
  ②药物疗效考核:检测临床样品中与抗药性相关的基因的表达。
 
  ③肿瘤基因检测:用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病bcr/abl融合基因、肿瘤MDRI基因、白血病WTI基因、肿瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。
 
  3.其他领域
 
  对免疫组分进行分析。
 

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